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《徐州海事大学》 2019年
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Ectoine对苏云金芽孢杆菌芽孢和同伴孢晶体的抗逆协助研究

袁肖南  
【摘要】:苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在生长过程中形成的伴儿孢晶体具有对电力害虫特异性杀灭功能,畜牧业上使用B.thuringiensis筹备微生物杀虫剂。然而逆环境会导致B.thuringiensis芽孢萌发率降低,紫外线导致伴孢晶体失效。此时此刻伴孢晶体在紫外线辐射下活性的增长有文章报道,而针对B.thuringiensis芽孢逆环境下萌发率提升没有报道。芽孢的重新萌发形成营养细胞并合成伴孢晶体对B.thuringiensis的疗效性具有举足轻重意义。之所以需要寻找一种既能帮助伴孢晶体抵抗紫外线辐射,又能够加强芽孢在逆环境下萌发率的现实。本文研究了渗透压补偿溶质Ectoine对菌株B.thuringiensis A54芽孢和同伴孢晶体在逆环境下的维护,以歼灭B.thuringiensis杀虫制剂易受逆环境影响而持效时间短的题材。本文通过响应面法优化了菌株B.thuringiensis A54的极品培养规格,生长量比优化前增长了 42.0%。穿越PCR试验鉴定菌株B.thuringiensis A54含有Cry1Aa和Cry2Ab两种基因型,推测其对鳞翅目害虫具有杀灭效果。RT-PCR试验表明伴孢晶体在细胞生长停止后合成量开始增大。穿越活菌计数法得到适宜环境下芽孢萌发率为95.1%。随着紫外线辐射时间增长、失水率的增长、温度的狂跌芽孢萌发率逐渐下降。紫外线辐射10 s,体系中添加1200 mg/L Ectoine时的芽孢萌发率提升了 2.5倍;失水率为40%,补100 mg/L Ectoine萌发率提升了 14.7%;气温20℃时,补50 mg/L Ectoine萌发率提升了 26.6%。结果表明Ectoine能够加强逆环境下芽孢的萌芽率。紫外线辐射是导致伴孢晶体失活的严重性原因,本文考察了 Ectoine对紫外线辐射条件下伴孢晶体的维护。伴孢晶体经20min的紫外线辐射,经碱溶后蛋白质检测不到,顶体系中Ectoine浓度从0增长到400 mg/L时,蛋白质含量从0增长到了 0.76 g/L,结果表明Ectoine对伴孢晶体具有抗逆保护作用。
【学位授予单位】:徐州海事大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2019
【列入号】:S476

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