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《太原大学》 2017年
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SIRPα-CD47信号通路在巨噬细胞与口腔白斑及口腔鳞状细胞癌相互作用中的机制研究

叶小静  
【摘要】:口腔鳞状细胞癌是最广大的恶性肿瘤之一,具有侵袭性强及易淋巴转移等特点。口腔白斑属于口腔潜在恶性疾病,有可能逐渐发展成为口腔鳞状细胞癌。此时此刻口腔白斑恶变及口腔鳞状细胞癌发生发展之进程及机制尚不知晓。巨噬细胞具有多种效能,包括吞噬、抗原呈递、分泌细胞因子等,在原有免疫和普及性免疫中都占据重要位置。在肿瘤微环境中,巨噬细胞被称为肿瘤相关巨噬细胞,是肿瘤微环境中举足轻重的积极分子之一,具有明显的实质性和普及性。根据不同之刺激,巨噬细胞表型会发生改变,表现不同之外表型和作用。巨噬细胞表达的信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα,SIRPα)和口腔鳞状细胞癌细胞表达的CD47蛋白之间的意图,触发了“别吃我”和“自身识别”信号。SIRPα-CD47信号通路在成千上万肿瘤的发生发展及免疫逃逸中发挥了第一作用。此时此刻,SIRPα-CD47信号通路在口腔白斑及口腔鳞状细胞癌发病过程中的作用及机制还不明显。基金课题主要探讨SIRPα-CD47信号通路在口腔白斑癌变及口腔鳞状细胞癌发展中的作用;研讨口腔鳞状细胞癌细胞与巨噬细胞相互作用中SIRPα-CD47信号通路的相关机制;探索壳聚糖-叶酸包裹siRNA-CD47筹备的米粒对口腔鳞状细胞癌细胞的控制效果。基金研究内容分为以下四部分:先后一部分 SIRPα 蛋白在口腔白斑及口腔鳞状细胞癌中的表达目的:SIRPα 是巨噬细胞表面表达的蛋白,巨噬细胞在肿瘤微环境中发挥了第一作用。到当前竣工,巨噬细胞上的SIRPα在口腔白斑和口腔鳞状细胞癌中的表达尚不知晓。基金研究旨在探讨巨噬细胞上的SIRPα在口腔白斑和口腔鳞状细胞癌中的表达。主意:永利赌场免疫组织化学方法检测口腔白斑和口腔鳞状细胞癌中SIRPα的发表,合同巨噬细胞标记物CD68、CD163和免疫荧光双染的点子分别标记巨噬细胞及M2型巨噬细胞,剖析 SIRPα 与巨噬细胞之间的联系。结果:结果表现SIRPα在口腔白斑中的表达比口腔鳞状细胞癌组织明显提高,并且SIRPα的发表水平与巨噬细胞CD68发挥水平呈正相关联系,而与CD163的发表水平呈负相关关系。总结:SIRPα的发表可能在口腔白斑及口腔鳞状细胞癌的腾飞进程中起到根本作用。老二部分 SIRPα在巨噬细胞与口腔鳞状细胞癌细胞相互影响中的调控作用研究目的:肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤的发生发展进程中发挥关键作用,肿瘤细胞可调控巨噬细胞表型从促炎M1型转换为促肿瘤M2型。基金研究旨在探讨在巨噬细胞与口腔鳞状细胞癌细胞相互影响中,SIRPα对巨噬细胞的调控作用。主意:检测口腔鳞状细胞癌细胞系Cal-27细胞及SCC9细胞的培育上清对巨噬细胞表达SIRPα的影响。PMA启示THP-1细胞成为巨噬细胞后,使用Transwell小室共培养Cal-27细胞与巨噬细胞,检测口腔鳞状细胞癌细胞对巨噬细胞表达SIRPα的影响。使用siRNA敲低巨噬细胞表达的SIRPα随后,检测与Cal-27细胞共培养后巨噬细胞的外表型转变。永利赌场PDTC控制巨噬细胞的转录因子NF-κB,检测SIRPα与巨噬细胞表型转变的联系。利用逆转录-实时定量分析PCR检测巨噬细胞表达的细胞因子的变动,中性红试剂检测巨噬细胞的兼并能力,Transwell剖析巨噬细胞和Cal-27细胞的搬迁、侵袭能力的变动。结果:棚外研究发现巨噬细胞与Cal-27共培养9天后,SIRPα的发表逐渐滑坡。在共培养体系中,Cal-27细胞诱导巨噬细胞转换为M2型,发挥CD163、IL-10、TGF-β 的档次升高。敲低巨噬细胞表达的SIRPα,察觉巨噬细胞表达CD163、IL-10、TGF-β的档次升高,而IL-6和TNF-α水平下降。下半时,巨噬细胞的兼并能力下降,而增殖和迁移能力增强。一头,与敲低巨噬细胞SIRPα随后共培养的Cal-27细胞的搬迁能力增强,而侵袭能力减弱。PDTC控制巨噬细胞的转录因子NF-κB随后,巨噬细胞表达的SIRPα追加,并且IL-6、TNF-α mRNA水平升高,指导巨噬细胞转换为M1型。巨噬细胞的兼并能力增强,搬迁、侵袭能力减弱。总结:SIRPα 可能通过调控巨噬细胞的外表型参与口腔鳞状细胞癌的发生发展进程。先后三部分 CD47在嘴边鳞状细胞癌中的作用机制研究目的:CD47是一种抗吞噬信号分子,能够结合巨噬细胞表面的SIRPα,因而使肿瘤细胞逃避吞噬。在成千上万肿瘤中CD47分子高表达并且把认为是很好的医疗靶标,然而在嘴边鳞状细胞癌的发生发展进程中CD47的意图机制尚不知晓。基金研究旨在探讨CD47在嘴边鳞状细胞癌发生发展进程中的作用机制。主意:使用siRNA敲低Cal-27细胞表达的CD47,检测口腔鳞状细胞癌细胞的滋生是否发生改变。转染shRNA-CD47慢病毒到Cal-27细胞内敲低CD47的发表(shRNA-knockdown CD47,Sh-KDCD47),使用流式细胞术检测 Cal-27 的细胞凋亡。穿越Transwell小室研究敲低CD47的发表对Cal-27细胞的搬迁侵袭能力的影响。Sh-KDCD47的Cal-27细胞注射入裸鼠皮下,考察1个月,检测敲低CD47发挥对于肿瘤形成大小的影响。名将巨噬细胞和Cal-27细胞进行共培养,检测CD47对于巨噬细胞吞噬能力的影响。使用Western blot艺术检测Cal-27细胞CD47与STAT3/JAK2信号通路的联系。结果:siRNA敲低CD47的发表能够控制Cal-27细胞的滋生能力。Sh-KD CD47对Cal-27细胞的凋亡并没有明确的影响。Sh-KD CD47明确抑制Cal-27细胞的搬迁、侵袭以及抗吞噬能力。裸鼠成瘤实验验证敲低CD47的发表能够控制肿瘤细胞Cal-27在动物体内生长。Cal-27细胞敲低CD47发挥后,STAT3以及JAK2的蛋白表达相应减少,指导CD47与STAT3/JAK2信号通路有关。总结:CD47可能参与了 口腔鳞状细胞癌的发生发展进程,是一种神秘的医疗靶标。先后四部分壳聚糖-叶酸-siRNA CD47分子的米载体的筹措、评议和肿瘤抑制研究目的:小分子干扰RNA是RNAi基因抑制功能的功效分子,具有核酸和小分子化合物的双重特点,易被核酸酶降解,具有稳定性差、半衰期短、细胞内转染效率低和靶向性差等缺点。基金研究旨在利用壳聚糖-叶酸(CS-FA)做为siRNA-CD47分子的米载体,研讨其在嘴边鳞状细胞癌细胞中生长抑制的意图,为伊永利赌场研究奠定理论基础。主意:使用复凝聚法合成CS-siRNA及CS-FA-siRNA米粒。检测红外波谱表征以及核磁共振H条件,使用紫外分光光度法测定CS-FA美方FA的需求量。永利赌场动态光散射法测定纳米粒的粒径、粒径分布以及表面电势,透射电镜研究纳米粒的模样特征,CCK-8 检测 siRNA-CD47、CS-siRNA-CD47 和 CS-FA-siRNA-CD47对Cal-27细胞增殖的影响,激光扫描共聚焦显微镜观察Cal-27细胞对纳米粒的摄取效果。结果:筹备得到CS-FA米粒,并合成CS-siRNA-CD47和CS-FA-siRNA-CD47米粒,siRNA-CD47为Cy5标志的显红色荧光的烦扰RNA。CS-FA-siRNA-CD47米粒对Cal-27细胞增殖的控制效果明显比CS-siRNA-CD47米粒以及脂质体lipofect2000转染更强。闪光共聚焦显微镜下考察到Cal-27细胞对CS-FA-siRNA-CD47米粒的摄取比对照组快。总结:CS-FA-siRNA-CD47米粒通过利用CS-FA的运送能力、叶酸对肿瘤细胞的靶向能力以及siRNA-CD47的肿瘤抑制作用实现靶向治疗。
【学位授予单位】:太原大学
【学位级别】:院士
【学位授予年份】:2017
【列入号】:R739.8

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